Will man z. B. untersuchen wie stark verschiedene Androgenrezeptor-Varianten
die Transkription Androgen-abhängiger Gene stimulieren, benötigt man eine Zellinie,
in die jeweils das zu untersuchenden Androgenrezeptor-Gen eingeschleust (transfiziert) wird.
In die Zellen wird zudem das Reporter-Gen transfiziert. Dabei handelt es sich um ein quasi
am »Reißbrett« entworfenes Gen-Konstrukr, das mit Hilfe rekombinanter Gen-Techniken
zusammengesetzt wird. Im regulativen Abschnitt enthält das Reporter-Gen in diesem Fall eine
oder mehrere Androgen-Response-Elemente (Enhancer), an die der Testosteron-aktivierte
Androgen-Rezeptor andockt und die Transkriptionsrate beeinflußt.
Abb.: Das
Chloramphenicol-Acetyltransferase(CAT)-Gen dient häufig als »Reporter« :
Mit Hilfe eines Transfektions-Vektors wird das CAT-Gen mitsamt einem Promotor in geeignete
Zellen eingeschleust. Exprimiertes Enzym kann in dem Zell-Lysat radioaktiv markiertes
(14C) Chloramphenicol mit Hilfe von Acety-CoA in Position 2 und 3 acetylieren,
so daß im Autoradiogramm zwei Banden des acetylierten Chloramphenicols erscheinen. Je dunkler
die Banden des acetylierten Chloramphenicols sind, desto höher war die CAT-Aktivität und
desto höher war auch die Transkriptionstate des CAT-Gens. Beides war in der linken Probe des
Autoradiogramms niedriger als in der rechten Probe.
Als kodierender Abschnitt wird häufig das Gen für das Enzym
Chloramphenicol-Acetyltransferase (CAT) verwendet. Das hat praktische Gründe, da
sich die Aktivität des Enzyms relativ leicht quantifizieren läßt.
Reviews
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