Worüber berichten Reporter-Gene?


Will man z. B. untersuchen wie stark verschiedene Androgenrezeptor-Varianten die Transkription Androgen-abhängiger Gene stimulieren, benötigt man eine Zellinie, in die jeweils das zu untersuchenden Androgenrezeptor-Gen eingeschleust (transfiziert) wird. In die Zellen wird zudem das Reporter-Gen transfiziert. Dabei handelt es sich um ein quasi am »Reißbrett« entworfenes Gen-Konstrukr, das mit Hilfe rekombinanter Gen-Techniken zusammengesetzt wird. Im regulativen Abschnitt enthält das Reporter-Gen in diesem Fall eine oder mehrere Androgen-Response-Elemente (Enhancer), an die der Testosteron-aktivierte Androgen-Rezeptor andockt und die Transkriptionsrate beeinflußt.

Abb.: Das Chloramphenicol-Acetyltransferase(CAT)-Gen dient häufig als »Reporter« : Mit Hilfe eines Transfektions-Vektors wird das CAT-Gen mitsamt einem Promotor in geeignete Zellen eingeschleust. Exprimiertes Enzym kann in dem Zell-Lysat radioaktiv markiertes (14C) Chloramphenicol mit Hilfe von Acety-CoA in Position 2 und 3 acetylieren, so daß im Autoradiogramm zwei Banden des acetylierten Chloramphenicols erscheinen. Je dunkler die Banden des acetylierten Chloramphenicols sind, desto höher war die CAT-Aktivität und desto höher war auch die Transkriptionstate des CAT-Gens. Beides war in der linken Probe des Autoradiogramms niedriger als in der rechten Probe.

 



Als kodierender Abschnitt wird häufig das Gen für das Enzym Chloramphenicol-Acetyltransferase (CAT) verwendet. Das hat praktische Gründe, da sich die Aktivität des Enzyms relativ leicht quantifizieren läßt.

    Reviews
  • Lewis JC, Feltus A, Ensor CM, et al. 1998. Applications of reporter genes. Anal Chem 70:579A-585A
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Mai 2005

Drucken Autor: JF Schindler